Paratoi sampl:
Casglu sampl: casglu samplau fel gwaed, meinwe, poer ac wrin yn ôl pwrpas yr arbrawf.
Echdynnu DNA: Defnyddiwch becyn echdynnu DNA pwrpasol i dynnu DNA o'r sampl.
Paratoi ymateb PCR:
Primers Dylunio: Dylunio parau primer penodol yn seiliedig ar y dilyniant targed ar gyfer ymhelaethu ar DNA templed.
Paratowch gymysgedd adweithio: gan gynnwys templed DNA, primers, byffer, DNA polymeras, DNTPs (deoxynucleoside triphosphates), mg 2+, ac ati.
Gosod rhaglen PCR:
Gosodiadau offeryn PCR: Rhowch baramedrau beic PCR rhagosodedig, megis tymheredd cyn -gynhesu 95 gradd, tymheredd dadnatureiddio (megis 95 gradd), tymheredd anelio (megis 55 gradd), tymheredd estyniad (megis 72 gradd), a nifer y cylchoedd.
Ymateb PCR:
Ychwanegwch sampl: Ychwanegwch y gymysgedd adweithio i'r tanc adweithio PCR neu'r sglodyn, ac fel rheol mae gan bob sampl un adwaith yn dda.
Perfformio PCR: Mae'r offeryn PCR yn cylchoedd yn ôl y rhaglen ragosodedig, gan gynnwys gwresogi, oeri, anelio a chamau estyn.
Dadansoddiad Cynnyrch:
Oeri ar ôl ymhelaethu: Ar ôl cwblhau PCR, mae'r sampl yn cael ei hoeri yn fyr ar 4 gradd.
Gwahanu electrofforetig: Defnyddiwch dechnoleg electrofforesis gel, fel electrofforesis gel agarose, i wahanu cynhyrchion PCR o wahanol hyd.
Sganio fflwroleuedd: Mae primers wedi'u labelu'n fflwroleuol yn allyrru golau tonfedd benodol yn y cynnyrch chwyddedig, ac mae'r offeryn PCR yn darllen y signalau hyn ac yn eu cofnodi.
Prosesu a Dehongli Data:
Meddalwedd Dadansoddi Data: Defnyddiwch feddalwedd arbenigol i ddadansoddi'r signal fflwroleuol a chyfrifo crynodiad neu grynodiad cymharol y darn targed.
Dehongli Canlyniadau: Yn seiliedig ar gromlin a llinell sylfaen PCR, penderfynwch a yw'r PCR yn llwyddiannus, p'un a yw'r darn targed yn bodoli, a faint ydyw.
Cofnodi a chadw canlyniadau:
Cofnodwch y canlyniadau yn yr adroddiad arbrofol a chadwch y data a'r samplau gwreiddiol yn iawn.